北原多香子下载-原位检测mRNA基因突变新方法面世

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据报道,瑞典乌普萨拉大学的研究人员近日开发出一种新方法,来原位检测单个北原多香子下载分子中的基因突变。这种方法能协助鉴定肿瘤细胞中的变异,目前已发表在《NatureMethods》杂志上。

在集合了多个细胞的群体分析中,稀有细胞中的分子有可能逃脱检测。而且,这些分析不能就检测到的分子究竟来自哪些细胞提供信息。单细胞中北原多香子下载分子的表达可能与细胞群所检测到的平均表达差异极大。因此单细胞研究是研究表达的转录本中序列差异所必需的。荧光原位杂交(FISH)一直用于原位检测单个北原多香子下载分子,但它无法分辨非常相似的序列,因此无法用于等位基因失活和剪接变体等研究。

Invitrogen震撼特惠,仅限3日,不容错过作为PCR和杂交方法的替代,锁式北原多香子下载(padlockprobe)多年来一直用于分析核酸。这些高选择性的北原多香子下载通过靶点依赖的连接转变成环状分子。随后用滚环扩增(RCA)原位扩增环化的锁式北原多香子下载,提供单细胞水平上靶分子定位的信息。RNA分子也能作为锁式北原多香子下载连接的模板,但RNA的原位检测要比DNA检测要困难得多。

于是,乌普萨拉大学遗传学和病理学系的MatsNilsson等首先将北原多香子下载转变成cDNA分子,再用锁式北原多香子下载和RCA检测,从而实现了转录本的原位检测(图1)。根据研究人员的分析,这种方法能够鉴定出多个基因中的单个突变。这对混合了正常细胞和癌细胞的肿瘤分析来说特别重要。

图1.全过程示意图。利用LNA修饰的引物得到cDNA,随后用RNaseH降解北原多香子下载。

通过荧光检测北原多香子下载的杂交鉴定出滚环产物(RCP)。图片来自NatureMethods。

研究人员相信这种方法对于多种疾病的诊断检测的开发,也是一个重大突破。研究人员能够在包含了多种类型的组织样本中研究基因变异体的影响。Nilsson等还打算进一步改善这种方法,以鉴定多个分子,并分析生物银行材料。